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索莱宝.CA1080-100T 支原体检测试剂盒 100T
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因为支原体的DNA中A-T含量高(55%~80%),所以可将其染色而被检测到。被支原体污染的细胞经染色后在细胞
周围可看到许多大小均一的荧光小点,即为支原体的DNA染色斑,说明有支原体污染。Hoechst 33258的最大激发波
长为346nm,最大发射波长为460nm;Hoechst 33258和双链DNA结合后,最大激发波长为352nm,最大发射波长为
461nm。
操作步骤: 贴壁细胞: 1.被检细胞接种于无菌的6孔细胞培养板中,接种密度为1-2×104。同时,接种正常无支原体感染的同种细胞,作为阴
性对照。 2.5天后,先吸去培养液,再加入1ml的固定液,静置20min, 3.吸去固定液,晾干。 4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液须覆盖全部被检细胞),37℃避光放置15-20min
或室温静置20~30min。 5.吸去Hoechst 33258工作液,加入2ml灭菌超纯水洗涤三次,直接风干。风干后加入一滴封片液,并以盖玻片覆盖。 6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发,观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。
悬浮细胞: 1.收集需检测的细胞,1500rpm,5min。 2.将收集的细胞涂片于载玻片上,再加1ml的固定液,静置20min。 3.吸去固定液,晾干。 4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液须覆盖全部被检细胞),37℃避光放置15~20min
或室温静置20~30min。 5.吸去Hoechst 33258工作液,用无菌水洗涤玻片3次,直接风干。风干后加入一滴封固液,并以盖玻片覆盖。 6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发,观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。
结果判断(参考): 阴性:仅见细胞的细胞核呈现黄绿色荧光。 阳性:除细胞外,细胞周围可见大量的大小均一的荧光着色颗粒。
注意事项: 1.Hoechst工作液对人体有害,请注意防护。 2.固定液有刺激性气味,建议在通风橱进行固定。 3.支原体检测时,最好用不含抗生素的培养液培养2~3代,这样容易避免假阴性结果。 4.本试剂盒用于6孔板检测时,可以进行50次检测反应。 5.检测支原体污染,可以使用支原体高效Vero细胞,这样可以提高检测灵敏度,即将被检测样品接种于Vero细胞进行检测。
注意: 1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。 2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
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