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Cell Counting Kit-8,简称CCK-8试剂盒或CCK8试剂盒,是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒。
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品名:Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)
规格:500次
WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还 原生成橙黄色的formazan(参考图1)。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
WST-8是MTT的一种升级替代产品,和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先,MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶解液来溶解;而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的,可以省去后续的溶解步骤。其次,WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次,WST-8比XTT和MTS更加稳定,使实验结果更加稳定。另外,WST-8和MTT、XTT等相比线性范围更宽,灵敏度更高。 WST-8和WST-1相比,检测灵敏度更高,更易溶解,并且更加稳定。 本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测,也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测,或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。 本试剂盒检测非常便捷。试剂盒仅一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液,无须再进行任何配制等操作。无须使用同位素,所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞,不必收集细胞,也不必采用额外的步骤去溶解formazan。可以用于大批量样品的检测。 酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。 WST-8对细胞无明显毒性。加入CCK-8溶液显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读板,使检测时间更加灵活,便于找到最佳测定时间。 本试剂盒可以测定500个样品。
包装清单:
产品编号 产品名称 包装 C0038 CCK-8溶液 5ml — 说明书 1份
产品编号
产品名称
包装
C0038
CCK-8溶液
5ml
—
说明书
1份
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
1. 通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定)。按照实验需要,进行培养并给予0-10微升特定的药物刺激。
2. 每孔加入10微升CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200微升,则需加入20微升CCK-8溶液,其它情况以此类推。可以用加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测,需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。
3. 在细胞培养箱内继续孵育0.5-4小时,对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。
4. 在450nm测定吸光度。如无450nm滤光片,可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长,例如650nm,作为参考波长进行双波长测定。
常见问题:
1. CCK-8溶液对细胞的毒性大小如何?
CCK-8溶液对细胞的毒性非常低,通常观察不到细胞毒性。细胞在CCK-8法检测后仍然可以正常生长,并 可以用于其它的细胞实验。但为了避免CCK-8溶液可能带来的对于后续检测的影响,除非该细胞极难获 得,否则不推荐把CCK-8溶液孵育过的细胞用于其它实验。
a. 适当增加细胞数量。
b. 延长加入CCK-8试剂后的孵育时间。
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