NEB E3321S mutation detection kit

EnGen 基因编辑突变检测试剂盒为检测基因编辑效率提供一整套的试剂。

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品牌：NEB
所属分类：工具酶

<p><div align="left"><br/></p><div align="left">     货品编号：  NEB.E3321S</div><div align="left">     品牌：  NEB</div><div align="left">     品名：  mutation detection kit</div><div align="left"><br/></div><div align="left">     <strong>产品描述</strong></div><div align="left">     EnGen 基因编辑突变检测试剂盒为检测基因编辑效率提供一整套的试剂。试剂盒操作的第一步，使用Q5 热启动超保真</div><div align="left">     聚合酶 2× 预混液从待测细胞中扩增出目的基因组的靶标区域（即通过 CRISPR/Cas9、TALENs或 ZFN等方法进行了基</div><div align="left">     因编辑的区域)，经退火、延伸步骤后，形成异源双链 DNA。经过多轮循环后，基因插入和缺失(Indels)等造成的突变就</div><div align="left">     将在扩增子池中得到富集。第二步，退火后的 PCR 产物用EnGen T7 核酸内切酶 I 进行切割。 EnGen T7 核酸内切酶 I </div><div align="left">     是一种结构特异性酶，可有效识别大于1个碱基的基因错配。当出现错配时，DNA 分子的两条链被切割从而形成较小的</div><div align="left">     片段。分析片段图谱可以对基因编辑实验的效率进行评估。</div><div align="left"> </div><div align="left">     EnGen 基因编辑突变检测试剂盒包含一组对照模板和引物预混液，可用作PCR 反应及 T7 核酸内切酶 I 消化实验的对照。</div><div align="left">     对照模板和引物预混液中含有2种对照质粒和1对对照引物。经 PCR 扩增、变性、退火，部分会形成含有10个碱基的插入</div><div align="left">     突变，此种异源双链 DNA 正是 T7 核酸内切酶 I 的底物，600 bp 的DNA 会被切割成 200 bp 和 400 bp 的两个片段；而同</div><div align="left">     源双链 DNA 则不被 T7 核酸内切酶 I切割。通过琼脂糖凝胶电泳或片段分析设备可以非常方便的分辨出同源（野生型）和</div><div align="left">     异源（突变）片段。</div><div align="left"> </div><div align="left"><span style="font-size: 13px;">     试剂盒的实验流程已经过优化，通过 Q5 热启动超保真聚合酶 2× 预混液扩增得到的 PCR 产物可以不经纯化而直</span></div><div align="left"><span style="font-size: 13px;">     接用 T7 核酸内切酶 I 进行消化。 异源双链DNA 分子只需 15 分钟就可以被完全切割，随后用蛋白酶 K 进行有效</span></div><div align="left"><span style="font-size: 13px;">     的反应终止。 此外， Q5 热启动超保真聚合酶 2× 预混液还可以用于在酶切之前优化靶点扩增实验 。</span></div><div align="left"> </div><div align="left"><strong><span style="font-size: 13px;"><span style="font-family: Arial;"><em>     图1： 实验流程</em></span></span></strong></div><p><span style="font-size: 13px;"><span style="font-family: Arial;"><em>     
<img width="575" height="541" alt="" src="http://www.neb-china.com/userfiles/E3321-2(1).jpg"></em></span></span></p>
<p><span style="font-size: 13px;"><span style="font-family: Arial;">     将引物设计在已完成基因编辑位点的两侧，PCR 产物变性、退火后会生成三种结构。其中一种结构能够被 T7 核酸</span></span></p>
<p><span style="font-size: 13px;"><span style="font-family: Arial;">     内切酶 I 切割（多于1个碱基错配的双链 DNA），经电泳分离和片段分析后，估算出基因编辑效率。</span></span></p>
<p><span style="font-size: 13px;"><span style="font-family: Arial;"><br/></span></span></p>
<h1 style="clear: both; margin-top: 10px; font-weight: bold; font-size: 12px; margin-bottom: 10px; margin-left: 15px; width: 560px; color: #ca9932; border-bottom: #ccc 1px solid; font-family: Arial; height: 18px"><p>试剂盒组分</p></h1><div style="padding-left: 15px; width: 560px; word-break: break-all; line-height: 24px; word-wrap: break-word"><table width="540" style="border-collapse:
    collapse;width:406pt" border="0" cellspacing="0" cellpadding="0"><colgroup><col width="322" style="mso-width-source:userset;mso-width-alt:10304;width:242pt"><col width="118" style="mso-width-source:userset;mso-width-alt:3776;width:89pt"><col width="100" style="mso-width-source:userset;mso-width-alt:3200;width:75pt"></colgroup><tbody><tr height="21" style="mso-height-source:userset;height:15.75pt"><td width="322" height="21" class="xl65" style="height:15.75pt;width:242pt">　</td><td width="118" class="xl66" style="border-left:none;width:89pt"><font class="font7">储存温度</font><font class="font6"> (°C)</font></td><td width="100" class="xl66" style="border-left:none;width:75pt"><font class="font7">浓度</font></td></tr><tr height="21" style="mso-height-source:userset;height:15.75pt"><td width="322" height="21" class="xl67" style="height:15.75pt;border-top:none;
            width:242pt"><span lang="EN-US">Q5<sup><font size="2">®</font></sup> <font class="font7">热启动超保真聚合酶</font><font class="font6"> 2×</font><font class="font7">预混液</font></span></td><td width="118" class="xl67" style="border-top:none;border-left:none;width:89pt"><span lang="EN-US">-20</span></td><td width="100" class="xl67" style="border-top:none;border-left:none;width:75pt"><span lang="EN-US">2×</span></td></tr><tr height="21" style="mso-height-source:userset;height:15.75pt"><td width="322" height="21" class="xl66" style="height:15.75pt;border-top:none;
            width:242pt"><span lang="EN-US">NEBuffer 2</span></td><td width="118" class="xl66" style="border-top:none;border-left:none;width:89pt"><span lang="EN-US">-20</span></td><td width="100" class="xl66" style="border-top:none;border-left:none;width:75pt"><span lang="EN-US">10×</span></td></tr><tr height="21" style="mso-height-source:userset;height:15.75pt"><td width="322" height="21" class="xl67" style="height:15.75pt;border-top:none;
            width:242pt"><span lang="EN-US">EnGen<font class="font8" size="2"><sup>™</sup></font><font class="font6"> T7 </font><font class="font7">核酸内切酶</font><font class="font6"> I</font></span></td><td width="118" class="xl68" style="border-top:none;border-left:none;width:89pt">　</td><td width="100" class="xl68" style="border-top:none;border-left:none;width:75pt">　</td></tr><tr height="21" style="mso-height-source:userset;height:15.75pt"><td width="322" height="21" class="xl66" style="height:15.75pt;border-top:none;
            width:242pt"><font class="font7">对照模板及引物预混液</font></td><td width="118" class="xl65" style="border-top:none;border-left:none;width:89pt">　</td><td width="100" class="xl65" style="border-top:none;border-left:none;width:75pt">　</td></tr><tr height="21" style="mso-height-source:userset;height:15.75pt"><td width="322" height="21" class="xl67" style="height:15.75pt;border-top:none;
            width:242pt"><font class="font7">蛋白酶</font><font class="font6"> K, </font><font class="font7">分子生物级</font></td><td width="118" class="xl67" style="border-top:none;border-left:none;width:89pt"><span lang="EN-US">-20</span></td><td width="100" class="xl67" style="border-top:none;border-left:none;width:75pt"><span lang="EN-US">4 mg/ml</span></td></tr><tr height="21" style="mso-height-source:userset;height:15.75pt"><td width="322" height="21" class="xl66" style="height:15.75pt;border-top:none;
            width:242pt"><span lang="EN-US">Quick-Load<sup><font size="2">®</font></sup> <font class="font7">紫色</font><font class="font6"> 2-Log DNA Ladder (0.1 - 10.0 kb)</font></span></td><td width="118" class="xl66" style="border-top:none;border-left:none;width:89pt"><span lang="EN-US">4</span></td><td width="100" class="xl65" style="border-top:none;border-left:none;width:75pt">　</td></tr><tr height="21" style="mso-height-source:userset;height:15.75pt"><td width="322" height="21" class="xl67" style="height:15.75pt;border-top:none;
            width:242pt"><font class="font7">凝胶上样缓冲液，紫色</font><font class="font6"> (6X)</font><font class="font7">，不含</font><font class="font6"> SDS</font></td><td width="118" class="xl67" style="border-top:none;border-left:none;width:89pt"><span lang="EN-US">25</span></td><td width="100" class="xl67" style="border-top:none;border-left:none;width:75pt"><span lang="EN-US">6×</span></td></tr></tbody></table><p> </p>
</div><h1 style="clear: both; margin-top: 10px; font-weight: bold; font-size: 12px; margin-bottom: 10px; margin-left: 15px; width: 560px; color: #ca9932; border-bottom: #ccc 1px solid; font-family: Arial; height: 18px">特性和用途</h1><div style="padding-left: 15px; width: 560px; word-break: break-all; line-height: 24px; word-wrap: break-word"><p><span style="font-size: 13px;"><span style="font-family: Arial;"><strong><span style="color: rgb(76, 76, 76);">所需材料（不提供）</span></strong></span></span></p>
<div align="left"><span style="font-size: 13px;"><span style="font-family: Arial;">PCR 寡聚核苷酸引物<br/> PCR 管<br/> 无核苷酸水<br/> PCR仪<br/> 带滤芯移液器吸头</span></span></div><div align="left"><span style="font-size: 13px;"><span style="font-family: Arial;"><br/></span></span></div><div align="left"><span style="font-size: 13px;"><span style="font-family: Arial;"><br/></span></span></div></div></div>

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