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  • TAKARA	RR047A	     逆转录试剂盒   20 μl反应 × 100 次

TAKARA RR047A 逆转录试剂盒 20 μl反应 × 100 次

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         货品编号:  TAKARA.RR047A 
         品牌:  TAKARA
         品名:  逆转录试剂盒   
         规格:  20 μl反应 × 100 次 
         储存条件:  -20℃

     

         制品内容 (Code No.: RR047A: 20 μl反应×100次量)


     

         ■ 制品说明
         为了准确地进行基因表达量分析,必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件,但Total RNA中常常混有基因组DNA,并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增,

         因此会造成解析结果不准确。为了避免这种情况发生,通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上,使基因组DNA得不到扩增。但是,此方法不适合具有单个

         外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因,同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析

         的生物种等也同样不适合于本方法。在这种情况下,我们常常需要对Total RNA样品进行DNase I处理,以除去残存的基因组DNA。而DNase I处理通常要进行复杂

         的纯化操作,同时会造成RNA的降解和损失。
         PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA 

         Eraser,通过42℃,2 min即可除去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分,经过gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行15 min的

         反转录反应合成cDNA,因此,20 min内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA合成的全过程。
         使用本制品合成的cDNA适用于嵌合法和探针法qPCR分析,可以根据实验目的,选择与TB Green  Premix Ex Taq  II (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR820Q/A/B)*、      TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420A/B)*、Probe qPCR Mix (Code No. RR391S/A/B) 组合使用。 
         *:Takara嵌合法Real Time PCR(qPCR)产品的名称从2017年12月下旬开始,将逐步变更为「TB Green系列」。产品Code、性能和原有产品相比没有变化,请

         继续放心使用。 
         产品名称将随新lot的产品逐步变更,产品网页或操作说明书可能会先于产品标签变更,望知悉! 

     

         ■ 试剂盒特长
         1. 含有去除基因组DNA的gDNA Eraser,只需2 min即可除去基因组DNA。
         2. 只需15 min即可高效合成Real Time PCR反应用模板cDNA,是进行2 Step Real Time RT-PCR反应的理想试剂。
         3. 反转录引物使用了Random 6 mers和Oligo dT Primer混合的RT Primer Mix,可以均匀合成样品中的各种cDNA。 
         4. 本制品提供了TB Green qPCR分析法和探针qPCR分析法各自适合的反应体系,可以根据分析方法选择体系。

         TB Green qPCR分析法和探针qPCR分析法区别如下:
         (1) 反转录反应中RT Primer Mix的用量。
         (2) 反转录反应中总RNA的用量。
         5. Real Time RT PCR定量需要建立标准曲线,建立标准曲线的条件就是需要将总RNA和反转录cDNA稀释到较低的浓度。如果用水或TE Buffer稀释时,由于模板浓

         度低不稳定,因而会缩小曲线范围,结果精度降低。本制品中附加了标准曲线制作用稀释液EASY Dilution (for Real Time PCR) ,将Total RNA或cDNA稀释至低浓度

         时也能够进行准确稀释,容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。 

     

         ■ 注意事项
         1.使用本制品合成的cDNA与TB Green关联制品组合使用时,建议使用:
         TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (Code No.RR820Q/A/B)
         TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420Q/A/B)
         以上制品与本制品组合使用,可以得到可信度高的结果。
         本制品与TB Green Fast qPCR Mix (Code No. RR430S/A/B) 组合使用时,有时反应性能不好,不推荐使用。 
         2. 当同时需要进行数次反应时,应先配制各种试剂的混合液 (Master Mix;其中包括RNase Free dH2O、Buffer、酶等),然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的

         试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
         3. gDNA Eraser和PrimeScript RT Enzyme Mix I 在使用前要小心地离心收集到反应管底部。由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取时应慢慢吸取。同时,要

         使用精确、量程适合的移液枪,并且不要使Tip插入液面过深,否则会因Tip壁粘着造成损失,而使酶量不足。
         4. 5×gDNA Eraser Buffer和5×PrimeScript Buffer 2(for Real Time)在使用前需Vortex振荡混匀,轻轻离心后使用。
         5. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip),以防止样品间污染。