TAKARA RR047A 逆转录试剂盒 20 μl反应 × 100 次

     因此会造成解析结果不准确。为了避免这种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组DNA得不到扩增。但是，此方法不适合具有单个

     外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析

     的生物种等也同样不适合于本方法。在这种情况下，我们常常需要对Total RNA样品进行DNase I处理，以除去残存的基因组DNA。而DNase I处理通常要进行复杂

     的纯化操作，同时会造成RNA的降解和损失。
     PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA 

     Eraser，通过42℃，2 min即可除去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分，经过gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行15 min的

     反转录反应合成cDNA，因此，20 min内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA合成的全过程。
     使用本制品合成的cDNA适用于嵌合法和探针法qPCR分析，可以根据实验目的，选择与TB Green  Premix Ex Taq  II (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR820Q/A/B)*、      TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420A/B)*、Probe qPCR Mix (Code No. RR391S/A/B) 组合使用。 
     *：Takara嵌合法Real Time PCR（qPCR）产品的名称从2017年12月下旬开始，将逐步变更为「TB Green系列」。产品Code、性能和原有产品相比没有变化，请

     继续放心使用。 
     产品名称将随新lot的产品逐步变更，产品网页或操作说明书可能会先于产品标签变更，望知悉！ 

     ■ 试剂盒特长
     1. 含有去除基因组DNA的gDNA Eraser，只需2 min即可除去基因组DNA。
     2. 只需15 min即可高效合成Real Time PCR反应用模板cDNA，是进行2 Step Real Time RT-PCR反应的理想试剂。
     3. 反转录引物使用了Random 6 mers和Oligo dT Primer混合的RT Primer Mix，可以均匀合成样品中的各种cDNA。 
     4. 本制品提供了TB Green qPCR分析法和探针qPCR分析法各自适合的反应体系，可以根据分析方法选择体系。

     TB Green qPCR分析法和探针qPCR分析法区别如下：
     (1) 反转录反应中RT Primer Mix的用量。
     (2) 反转录反应中总RNA的用量。
     5. Real Time RT PCR定量需要建立标准曲线，建立标准曲线的条件就是需要将总RNA和反转录cDNA稀释到较低的浓度。如果用水或TE Buffer稀释时，由于模板浓

     度低不稳定，因而会缩小曲线范围，结果精度降低。本制品中附加了标准曲线制作用稀释液EASY Dilution (for Real Time PCR) ，将Total RNA或cDNA稀释至低浓度

     时也能够进行准确稀释，容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。 

     ■ 注意事项
     1．使用本制品合成的cDNA与TB Green关联制品组合使用时，建议使用：
     TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (Code No.RR820Q/A/B)
     TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420Q/A/B)
     以上制品与本制品组合使用，可以得到可信度高的结果。
     本制品与TB Green Fast qPCR Mix (Code No. RR430S/A/B) 组合使用时，有时反应性能不好，不推荐使用。 
     2. 当同时需要进行数次反应时，应先配制各种试剂的混合液 (Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、酶等)，然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的

     试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
     3. gDNA Eraser和PrimeScript RT Enzyme Mix I 在使用前要小心地离心收集到反应管底部。由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。同时，要

     使用精确、量程适合的移液枪，并且不要使Tip插入液面过深，否则会因Tip壁粘着造成损失，而使酶量不足。
     4. 5×gDNA Eraser Buffer和5×PrimeScript Buffer 2（for Real Time）在使用前需Vortex振荡混匀，轻轻离心后使用。
     5. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip)，以防止样品间污染。